PD-L1×4-1BB双抗：Acasunlimab

Acasunlimab是Genmab基于DuoBody®平台开发的一款1:1结构的PD-L1 x 4-1BB双特异性抗体。去年的ASCO会议上他们报道了Acasunlimab单独或与pembrolizumab联合治疗既往接受标准治疗失败的mNSCLC患者，这些患者均为PD-L1阳性且接受过一种以上PD-L1抗体治疗。结果显示与pembrolizumab联用（Q6W）中位OS为17.5个月，12个月的生存率为69%，同时与单用相比毒性可控，肝毒性作为关键的AE可以通过类固醇或者推迟给药控制[1]。

当时临床结果刚报道出来的时候还引起了轰动，然后俩月后Genmab便宣布收回Acasunlimab的权益[2]。这里面有BioNtech自己的战略考虑，不过这个临床方案，怎么看都像是在给K药做嫁妆，无论是Q3W还是Q6W，K药的用量雷打不动而效果最优的Q6W方案Acasunlimab的用量直接少了一半。其实剂量定在100mg也挺无奈的，因为这个抗体的钟形效应明显，同时根据1期临床的安全性有效性数据和PK/PD建模分析这个抗体在100mg的时候才能最大程度的发挥4-1BB的活性[3]。去年我也分享了维立志博的LBL-024，他们的剂量直接干到了15mg/kg，当时也分析了不同的剂量选择可能跟抗体的结构有较大关系。Genmab今年的Investor Presentation中显示他们仍在继续开发Acasunlimab[4]。昨天在扫文献的时候读到了Genmab报道的一篇关于Acasunlimab（PD-L1 x 4-1BB）的转化实验[5]，看里面的内容跟他们之前的一篇文章有点类似[6]，算是解答了我之前的几个疑问。其实文章主要是结合了他们的临床开发策略讨论了Acasunlimab与PD-1抗体联用的协同效应。

体外的MLR实验显示Acasunlimab可以增强T细胞因子分泌能力（A），也能增强耗竭T细胞的因子分泌（C），与PD-1抗体联用后具有更强的协同作用（B、D）。

在体内模型中他们使用了一个小鼠的替代分子，anti-mPD-L1×m4-1BB，根据前面提到的PBPK/RO模型，他们也预测了不同剂量的双抗在小鼠中同时结合4-1BB和PD-L1的数量以及对PD-1/PD-L1复合物的阻断，这里可以看到钟形效应也是比较明显的，双抗在1-5mg/kg的剂量下才能达到最优的4-1BB激活，不过没有加入PD-1抗体时对PD-1/PD-L1的阻断并不完全（27-87%不等），如果加入10mg/kg的PD-1抗体就能完全阻断PD-1/PD-L1的结合而且不影响双抗对4-1BB的激活。根据模型结果，体内的实验选择的剂量为anti-mPD-L1×m4-1BB：5mg/kg，PD-1：10mg/kg。

使用替代抗体在MC38、MB49、B16F10以及Pan02等肿瘤的C57BL/6小鼠模型中对比了双抗、PD-1以及联用的抑瘤效果，结果显示无论是热肿瘤还是冷肿瘤双抗与PD-1抗体的联用具有比单独使用双抗或PD-1抗体更有效的抑瘤效果，同时联用也极大的延长了小鼠的生存周期，当然治疗效果随着肿瘤对IO的耐药程度的提高是越来越差。下图展示的是在MC38模型中的数据，联用组的小鼠生存时间优于单用组而且较大比例的小鼠获得CR，CR的小鼠再接种也能维持免疫记忆。

接下来在4-1BB、PD-1、PD-L1三转基因小鼠中对比chi-acasunlimab、pembrolizumab以及联用的抑瘤效果，与野生型小鼠的结果一致，联用组展现出更强的协同效果。

不过在接种MC38野生型细胞的模型中联用虽然也能展现出一定的抑瘤效果，但是效果却差了一截，特别是chi-acasunlimab单用以及联用组。这说明肿瘤细胞是否表达huPD-L1对双抗的体内抑瘤效果影响较大。

肿瘤组织IHC染色显示双抗和PD-1可以增加CD3+以及CD8+T细胞的浸润，联用可以进一步增加了T细胞的浸润（A）。流式结果显示肿瘤引流淋巴结（TDLN）中的CD3+、CD4、以及CD8+细胞也能被增加，这里双抗的效果比PD-1的效果更强，当然联用后也能进一步的提高（B）。

TCR测序分析的结果显示联用组的TDLN中TCR的多样性更少，不过Top TCR克隆的丰度都增加了，这说明联用组可以扩增肿瘤特异性的T细胞（C、D）。除了肿瘤特异的T细胞的数量以及浸润，联用组也增加了T细胞的增殖和杀伤能力（E、F）。

最后，他们的结果显示双抗与PD-1抗体联用后可以增加TME中杀伤性stem-like CD8+T细胞的数量，这群细胞具备更有的杀伤功能而且对IL2具备更好的响应，也证明了双抗与PD-1抗体联用具备协同效应。

讨论

这篇文献解释了acasunlimab与PD-1抗体联用可以增强抗肿瘤免疫反映的效果以及持续时间，这个数据也跟前面提到的那个2期临床的数据一致。从体内模型看如果肿瘤细胞不表达PD-L1，双抗的抗肿瘤效果得不到完全的释放，说明双抗在肿瘤中也起到了engage的功能而且这对抗肿瘤效果起到较大的影响，这也解释了为什么他们3期招募的是PD-L1阳性的患者。去年的ASCO也对比了不同PD-L1表达患者的响应率，现在估计这个双抗后续只能绑定PD-1一起开发了。

参考文献：

1. Acasunlimab (DuoBody-PD-L1x4-1BB) Alone or in Combination with Pembrolizumab in Patients with Previously Treated Metastatic Non-Small Cell Lung Cancer: Initial Results of a Randomized, Open-Label Phase 2 Trial

2. https://ir.genmab.com/news-releases/news-release-details/genmab-takes-full-control-acasunlimab-development-program

3. Preclinical Characterization and Phase I Trial Results of a Bispecific Antibody Targeting PD-L1 and 4-1BB (GEN1046) in Patients with Advanced Refractory Solid Tumors

4. https://ir.genmab.com/static-files/0a7a7302-59d4-45fc-b6b7-5caa33222e07

5. Acasunlimab, an Fc-inert PD-L1×4-1BB bispecific antibody, combined with PD-1 blockade potentiates antitumor immunity via complementary immune modulatory effects

6. An Fc-inert PD-L1×4-1BB bispecific antibody mediates potent anti-tumor immunity in mice by combining checkpoint inhibition and conditional 4-1BB co-stimulation