靶向MSLN的TRuC-T：TC-210 T临床前实验
MSLN是一个具有吸引力的实体瘤靶点，无论是CD3双抗还是CAR-T布局了此靶点，希望能在实体瘤中打开局面。但是迄今的结果显示CAR-T在实体瘤中的效果一般，无论是响应率还是疾病稳定时间都比较短。这可能是因为CAR-T的激活信号与T细胞本身的激活信号差异所至，因为CAR-T只有CD3ζ亚基与共刺激因子的信号，另外肿瘤微环境进一步缩小了CAR-T在实体瘤的应用前景。不过近期的一篇文献MSLN-targeted CAR-T跟PD-1联用治疗实体瘤患者ORR能达到63%，看来细胞治疗还是得需要免疫检查点的联用。本文作者使用TRuC-T平台构建了靶向MSLN的TRuC-T：TC-210 T，并与CAR-T比较了体内外的抑瘤作用。
MSLN靶向的TRuC-T体外杀伤肿瘤细胞
下图a展示了MSLN的ε-TRuC-T的结构，anti-MSLN抗体为单域抗体MH-1，转染后的T细胞命名为 TC-210 T；同时构建了一个MSLN-CAR-T 作为对照胞内信号为41BB-CD3ζ ；转染后TRuC-T在CD4和CD8细胞中的比例分别为20%-30%和4%-9%（图b）；TC-210 T能在24h内杀伤高表达MSLN的细胞，对阴性细胞无影响（图c）；TC-210 T细胞的增殖也需要MSLN阳性细胞的刺激（图d）；TC-210 T杀伤靶细胞后能够释放细胞因子，在无靶细胞时不释放因子（图e）。
TC-210 T在体内的抑瘤作用
小鼠OVCAR3-luc肿瘤模型中可以看到TC-210 T在用药9天后就能明显减少肿瘤负荷，到13天后6/7的小鼠达到CR并且直至27天都能保持tumor free（图a，b）；接下来使用A549-M-luc皮下接种的肿瘤模型比较TC-210 T和CAR-T的抑瘤作用，可以看到TC-210 T的抑瘤作用稍快于MSLN-BBζ CAR-T（图c），然后同时比较了TC-210 T和MSLN-BBζ CAR-T因子分泌的水平，TC-210 T的因子分泌水平低于MSLN-BBζ CAR-T，而且CAR-T中大部分的细胞因子会长时间维持较高水平（图d）。
TC-210 T可以更高效的定位到肿瘤并快速清除肿瘤细胞
与上一步的体内实验一致，TC-210 T相比MSLN-BBζ CAR-T可以更快的清除MSTO-M-Luc肿瘤，TC-210 T无论是开始起效还是完全清除肿瘤都更快（图a）；IHC结果显示用药7天后肿瘤微环境中的T细胞浸润TC-210 T相比MSLN-BBζ CAR-T更多（图b，c）；与IHC结果类似，流式检测结果显示使用TC-210 T的肿瘤中CD3 T比例也更高（图d）；靶点相关的TC-210 T也比MSLN-BBζ CAR-T有更多的肿瘤浸润（图e）；CD3阳性T细胞中TC-210的比例也高于MSLN-BBζ （图f）。
肿瘤微环境中的TC-210 T相比MSLN-BBζ CAR-T激活的更快
对用药7天后的肿瘤中的CD3阳性T细胞进行转录组分析，发现TC-210 T用药组的T细胞有更多T细胞激活和效应功能相关的基因转录（图a）；TC-210 T也比MSLN-BBζ CAR-T表达更高的CD69，但是CD25的表达水平较低（图b）；其中T细胞激活以及衰竭maker也是TC-210 T更高，不过Tim3的表达水平两者一致（图c）。
TC-210 T代谢途径转向线粒体途径
从上一张图我们可以看到TC-210 T中HK2基因的转录水平更低，这说明TC-210 T和MSLN-BBζ CAR-T的代谢途径可能有所差异，因此接下来比较了它们代谢的差异。OCR（氧消耗速率）和 ECAR（细胞外酸化速率）显示TC-210 T和MSLN-BBζ CAR-T基础呼吸代谢类似，但是TC-210 T备用呼吸能力更强同时糖酵解活性更低（图a，b）。体内实验也与体外实验一致，CD4+ TC-210 T的糖酵解活性低于CD4+ MSLN-BBζ CAR-T，二者的CD8+细胞糖酵解水平类似（图c）。而且TC-210 T的线粒体更大，说明TC-210 T的代谢途径更转向氧化磷酸化。
讨论
这篇文献比较了靶向MSLN的TRuC-T TC-210 T跟CAR-T的抗肿瘤活性，TC-210 T的抗肿瘤活性依赖于抗原的表达。在体内TC-210 T起作用的时间以及完全清除肿瘤的速度都快于CAR-T，这可能是由于TC-210 T可以更快更多的肿瘤浸润能力相关，另外有报道指出CAR-T被激活后CAR也会发生下调。尽管TC-210 T可以有效的清除肿瘤但是释放的细胞因子水平低于CAR-T，可能由于不用的免疫突触形成机制以及胞内信号通路所至。因为有报道显示CAR-T的免疫突触为非典型的结构，而TRuC-T的免疫突触更类似于天然的结构，同时T细胞的激活信号为天然的TCR信号。低水平的细胞因子释放代表更优的安全性，可能TC-210 T与不包含共刺激信号有关。最后肿瘤部位的TC-210 T代谢通路也与CAR-T不同，并没有过多依赖于糖酵解途径，更大的线粒体也意味着TC-210 T更容易在肿瘤微环境中存活。
参考文献
Mesothelin-targeting T cells bearing a novel T cell receptor fusion construct (TRuC) exhibit potent antitumor efficacy against solid tumors
